LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 轉(zhuǎn)染試劑 P09310 綜合了低的細(xì)胞毒性和高的轉(zhuǎn)染效率，讓更多細(xì)胞存活，且?guī)?lái)生理上更相關(guān)的結(jié)果。而且，轉(zhuǎn)染步驟也相當(dāng)簡(jiǎn)單：只需用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋轉(zhuǎn)染試劑，與質(zhì)粒共同孵育，然后逐滴加入細(xì)胞中。研究人員所需的優(yōu)化少，當(dāng)然，在轉(zhuǎn)染之前，你還是得優(yōu)化轉(zhuǎn)染試劑與DNA的比例。建議的比例是3:1，但對(duì)于特定研究，2:1至7:1的比例可能會(huì)提高轉(zhuǎn)染效率。
LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 轉(zhuǎn)染試劑 P09310 步驟：
1.轉(zhuǎn)染前一天，胰酶消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)，細(xì)胞鋪板，使其在轉(zhuǎn)染日密度為90-95%。細(xì)胞鋪板在2ml含血清，不含抗生素的正常生長(zhǎng)的培養(yǎng)基中。
2.對(duì)于每孔細(xì)胞，使用250ul無(wú)血清培養(yǎng)基(如OPTI-MEMI培養(yǎng)基)稀釋4.0ugDNA，輕輕混勻。
3.使用前將Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑輕輕混勻，用250ul無(wú)血清培養(yǎng)基(如OPTI-MEMI培養(yǎng)基)稀釋10ulLipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑，輕輕混勻。Lipofectamine2000稀釋后，在5分鐘內(nèi)同稀釋的DNA混合(<30分鐘)。NOTE：若使用DMEM培養(yǎng)基，則需在5分鐘內(nèi)同稀釋的DNA混合。
4.混合稀釋的DNA(第二步)和稀釋的Lipofectamine2000(第三步)。室溫放置20分鐘。
5.(optional)將6孔板中的舊營(yíng)養(yǎng)液吸出，用無(wú)血清培養(yǎng)基清洗兩次。加入2ml無(wú)血清配養(yǎng)基。
6.直接將復(fù)合物加入到每孔中，搖動(dòng)培養(yǎng)板，輕輕混勻。
7.在37℃，5%CO2中保溫24-48小時(shí)。無(wú)需去掉復(fù)合物或更換培養(yǎng)基。或者在4-5小時(shí)后更換培養(yǎng)生長(zhǎng)基也不會(huì)降低轉(zhuǎn)染活性。
8.在細(xì)胞中加入復(fù)合物24-72小時(shí)后，分析細(xì)胞抽提物或進(jìn)行原位細(xì)胞染色，檢測(cè)報(bào)告基因活性。這依賴于細(xì)胞類(lèi)型和啟動(dòng)子活性。對(duì)穩(wěn)定表達(dá)，在開(kāi)始轉(zhuǎn)染一天后將細(xì)胞傳代至新鮮培養(yǎng)基中，兩天后加入篩選抗生素。進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)需要數(shù)天或數(shù)周。
